LysM-Cre;LSL-DTR;CCSP-rtTA;TetO-EGFRL858R 是一個四重轉基因小鼠模型，其核心用途是在誘導型EGFR突變肺癌模型中，實現對巨噬細胞的特異性、可誘導清除，從而研究巨噬細胞在腫瘤發生發展中的功能。

模型構成與工作原理：LysM-Cre;LSL-DTR;CCSP-rtTA;TetO-EGFRL858R 小鼠模型原理

該模型的四個遺傳元件協同工作，分為腫瘤誘導和巨噬細胞清除兩個獨立且可控的系統：

1. 腫瘤誘導系統：CCSP-rtTA + TetO-EGFRL858R

CCSP-rtTA：由大鼠Clara細胞分泌蛋白（CCSP，又稱Scgb1a1）啟動子驅動表達反式激活因子（rtTA）。該啟動子主要靶向肺部的II型肺泡上皮細胞（AT2）和Clara細胞。

TetO-EGFRL858R：攜帶人源EGFR L858R突變cDNA，其表達受四環素響應元件（TRE） 調控。

工作原理：當給予小鼠多西環素（DOX） 后，rtTA蛋白與DOX結合，激活TRE，從而在肺上皮細胞中特異性表達EGFR L858R突變蛋白，驅動肺腺癌（LUAD）的發生。未加DOX時，腫瘤不會發生，實現時間可控的腫瘤誘導。

2. 巨噬細胞清除系統：LysM-Cre + LSL-DTR

LysM-Cre：溶菌酶M（LysM/Lyz2）啟動子驅動Cre重組酶表達，主要在髓系細胞（包括單核細胞、巨噬細胞） 中具有活性。

LSL-DTR：在Rosa26位點攜帶一個LoxP-Stop-LoxP（LSL） 序列，其后是白喉毒素受體（DTR） 基因。在Cre重組酶作用下，Stop序列被切除，DTR得以表達。

工作原理：在LysM-Cre;LSL-DTR小鼠中，巨噬細胞會表達DTR。當腹腔注射白喉毒素（DT） 后，DT與DTR結合，特異性地殺死表達DTR的巨噬細胞，實現可誘導的巨噬細胞清除。

3. 系統整合：在四轉基因小鼠中，DOX飲水誘導肺部腫瘤發生，DT注射清除巨噬細胞。兩個系統獨立工作，研究者可以按需組合，精確控制腫瘤誘導和巨噬細胞清除的時間窗口。

模型應用場景

該模型主要用于研究巨噬細胞（尤其是肺泡巨噬細胞，AMs）在EGFR突變驅動的肺癌中的作用。典型實驗設計如下：

時間窗口：通常在DOX誘導腫瘤4–6周后開始給予DT清除巨噬細胞，以觀察其對已形成腫瘤的影響。

模型核心用途：

驗證巨噬細胞的促瘤功能：通過DT清除巨噬細胞，觀察腫瘤負荷（如肺干重） 是否下降。

解析巨噬細胞亞群：可結合流式細胞術，分析清除后肺泡巨噬細胞（AMs）和間質巨噬細胞（IMs） 的動態變化。

機制研究：可進一步探究巨噬細胞通過GM-CSF等因子與腫瘤細胞的互作。

模型局限與注意事項：

•清除特異性：LysM-Cre在中性粒細胞中也可能有一定活性，DT清除可能不僅限于巨噬細胞，需在實驗中通過流式細胞術驗證清除效率。

•DT毒性：DT本身對小鼠具有劑量依賴性毒性，超過100 ng/g體重的劑量可能對小鼠產生毒性，需優化注射方案。

•巨噬細胞再增殖：DT清除后，巨噬細胞可能通過局部增殖而快速再填充，需密切監測清除的持續時間。

•基因背景：常用C57BL/6背景，不同背景可能影響腫瘤發生和免疫應答。

•遺傳品系來源：LysM-Cre（JAX #004781）和LSL-DTR（JAX #007900）均來自Jackson Laboratory，TetO-EGFRL858R（MGI:3690078）和CCSP-rtTA（MGI:2445707）也有標準品系可供獲取。

總結來說，這一四重轉基因模型通過DOX誘導腫瘤和DT清除巨噬細胞兩個獨立可控的系統，為在體內動態研究巨噬細胞在EGFR突變肺癌中的功能提供了強有力的工具。此外，還可以使用荷蘭Liposoma巨噬細胞清除劑ClodronateLiposomes氯膦酸鹽脂質體鼻腔給藥清除肺泡巨噬細胞，進一步驗證實驗數據。