多發(fā)性硬化（MS）等神經(jīng)系統(tǒng)疾病中殘疾的累積，反映了由反復(fù)發(fā)作的炎性脫髓鞘所引起的軸突損傷和丟失的日益加重。在MS病程早期，這種神經(jīng)炎癥反應(yīng)不僅誘發(fā)脫髓鞘，還會(huì)激活內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制，介導(dǎo)受損髓鞘的修復(fù)，這一過(guò)程稱為髓鞘再生。髓鞘再生由少突膠質(zhì)細(xì)胞執(zhí)行，并具有明顯的階段特征：首先，病變區(qū)域內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（OPCs）發(fā)生擴(kuò)增和動(dòng)員，隨后OPCs分化為成熟的髓鞘形成性少突膠質(zhì)細(xì)胞，并對(duì)受累軸突進(jìn)行髓鞘再生。然而，在進(jìn)展型MS患者中，髓鞘再生常常失敗，導(dǎo)致慢性脫髓鞘斑塊和膠質(zhì)瘢痕組織形成。這具有深遠(yuǎn)的病理生理后果，因?yàn)樗枨实膩G失不僅破壞軸突功能，還通過(guò)增加軸突對(duì)炎性介質(zhì)的易感性以及破壞髓鞘化少突膠質(zhì)細(xì)胞所提供的營(yíng)養(yǎng)支持，損害軸突的結(jié)構(gòu)完整性。

目前對(duì)這些疾病中髓鞘再生受阻的確切原因尚不清楚。然而，越來(lái)越多的證據(jù)表明，這與過(guò)度炎癥性微環(huán)境以及OPCs自身分化為成熟髓鞘形成性少突膠質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)在能力不足有關(guān)。因此，當(dāng)前促進(jìn)髓鞘再生的策略包括：刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）內(nèi)常駐小膠質(zhì)細(xì)胞和外周來(lái)源的浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞，使其向具有抗炎和修復(fù)特征的表型極化。另一種有前景的增強(qiáng)修復(fù)策略是直接調(diào)控調(diào)節(jié)OPC分化的信號(hào)通路，如富含亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域蛋白1（LINGO-1）、Notch、Wnt以及過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）通路?？傮w而言，能夠同時(shí)影響免疫過(guò)程和修復(fù)過(guò)程的治療藥物，預(yù)計(jì)將是促進(jìn)髓鞘再生的策略。

此前，我們已證明根皮素（phloretin）——一種大量存在于草莓和蘋(píng)果中的二氫查爾酮類化合物，已知具有免疫調(diào)節(jié)和抗氧化特性——能夠通過(guò)改變吞噬細(xì)胞的表型來(lái)緩解神經(jīng)炎癥。在本研究中，我們展示了根皮素在cuprizone誘導(dǎo)的脫髓鞘后也能加速髓鞘再生。通過(guò)體外OPC培養(yǎng)和Liposoma清除劑小膠質(zhì)細(xì)胞清除的離體腦片實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)的髓鞘再生是根皮素直接作用于OPC成熟的結(jié)果。分子對(duì)接和功能性PPARγ拮抗劑/激動(dòng)劑實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，根皮素通過(guò)作為PPARγ的有效激動(dòng)劑來(lái)刺激OPC分化。由于根皮素同時(shí)影響MS的免疫調(diào)節(jié)和神經(jīng)退行性兩個(gè)方面，它有望成為治療這種脫髓鞘疾病的天然藥物。

用荷蘭Liposoma小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞清除劑clodronate liposomes處理，確實(shí)會(huì)損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘再生能力。其背后的機(jī)制主要涉及以下幾個(gè)方面：

1.直接影響髓鞘再生：一項(xiàng)2001年的經(jīng)典研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠脊髓的脫髓鞘模型中，使用clodronate liposomes清除巨噬細(xì)胞后，少突膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的髓鞘再生在3周時(shí)顯著減少。這表明巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞是成功進(jìn)行髓鞘再生的關(guān)鍵參與者。

2.干擾關(guān)鍵修復(fù)細(xì)胞（OPCs）：后續(xù)研究進(jìn)一步揭示了其作用機(jī)制。巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞的減少，與少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（OPCs）的招募延遲有關(guān)。OPCs是分化成成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞、執(zhí)行髓鞘再生的“主力軍"。研究發(fā)現(xiàn)，這種效應(yīng)獨(dú)立于髓鞘碎片的清除，提示小膠質(zhì)細(xì)胞可能通過(guò)其他信號(hào)通路（而非僅僅是“打掃衛(wèi)生"）來(lái)影響OPCs。同時(shí)，這種細(xì)胞清除還改變了局部胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）等生長(zhǎng)因子的表達(dá)，而這些因子對(duì)于OPCs的生存和分化至關(guān)重要。

3.關(guān)鍵的時(shí)間窗口：小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的作用似乎存在一個(gè)“關(guān)鍵期"。研究發(fā)現(xiàn)，如果在脫髓鞘后的早期階段進(jìn)行清除，髓鞘再生會(huì)受損；但如果延遲清除，直到修復(fù)過(guò)程的后半段再清除，則對(duì)最終的修復(fù)結(jié)果沒(méi)有影響。這表明它們主要在啟動(dòng)和早期階段發(fā)揮作用。

氯膦酸鹽脂質(zhì)體ClodronateLiposomes體外清除腦切片小膠質(zhì)細(xì)胞方案：

清除檢測(cè)：

圖. 氯膦酸鹽脂質(zhì)體在體外和離體環(huán)境中均可清除吞噬細(xì)胞。

A. 經(jīng)氯膦酸鹽脂質(zhì)體或空載脂質(zhì)體處理的骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞的存活率，顯示氯膦酸鹽脂質(zhì)體具有清除巨噬細(xì)胞的能力（n=5-6）。

B-C. 離體小腦腦片培養(yǎng)物（BSCs）中F4/80?細(xì)胞的代表性圖像及定量分析，顯示氯膦酸鹽脂質(zhì)體介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞清除效果（n=9）。比例尺，25 µm。

D. 空載脂質(zhì)體處理的BSCs與對(duì)照BSCs的髓鞘再生指數(shù)比較（n=3）。

E. 小膠質(zhì)細(xì)胞清除的BSCs與對(duì)照BSCs的髓鞘再生指數(shù)比較（n=6）。

Ctrl，對(duì)照；phl，根皮素。數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。p < 0.01（非配對(duì)雙尾t檢驗(yàn)）。

清除表型：

論文信息：

論文題目：Phloretin enhances remyelination by stimulating oligodendrocyte precursor cell differentiation

期刊名稱：PNAS

時(shí)間期卷：119 (46) e2120393119

DOI: 10.1073/pnas.212039311

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)：C-010

規(guī)格：10ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes

辦事處：靶點(diǎn)科技

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體體外培養(yǎng)清除小膠質(zhì)細(xì)胞模型里巨噬細(xì)胞。荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑ClodronateLiposomes見(jiàn)刊于PNAS：根皮素通過(guò)刺激少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞分化來(lái)增強(qiáng)髓鞘再生。

Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除巨噬細(xì)胞的材料和方法：

In vivo macrophage depletion

Cerebellar slices were obtained from C57BL/6JOlaHsd mouse pups at the age of P9 or P10, as described previously (31, 32). To induce demyelination, slices were treated with lysolecithin (LPC; 0.5 mg/mL; Sigma-Aldrich) 3 d after isolation for 16 h. After demyelination, slices were treated daily with phloretin (50 μM) or vehicle for 6 d. For microglia depletion, slices were treated with clodronate or empty liposomes (0.5 mg/mL; LIPOSOMA) immediately after isolation for 24 h. After 3 d, slices were treated with LPC for 16 h followed by daily treatment with phloretin or vehicle.

巨噬細(xì)胞清除材料和方法文獻(xiàn)截圖：